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兩種脲酶活性定性測定(dìng)方法及比較

時間:2010-10-11    點擊: 次    來源:蜗牛视频app(guāng)畜牧網    作者:陽(yáng)光畜(chù)牧網 - 小(xiǎo) + 大

    隨著膨(péng)化技術(shù)在飼(sì)料(liào)工業中推廣普及,越來越(yuè)多的飼料生產(chǎn)商(shāng)在配方中使用膨化大豆粉,與其(qí)它蛋白資源一樣,大豆的適度熟化非常重要(yào),熟(shú)化程度低會含抗胰蛋(dàn)白酶等營(yíng)養抑製(zhì)因子,熟化度過高又會導致氨基酸利用率低。判斷膨化大豆粉是否合格的主要指標是(shì)脲酶活性。脲酶活性(xìng)是指:在30±5℃和PH值等於7的條(tiáo)件下,每分(fèn)鍾每克膨化大豆分解尿素所釋放的氨(ān)態氮的毫克數。脲酶(méi)本身無營養意(yì)義,但它與(yǔ)抗胰蛋白酶的(de)含量接近,並且遇熱變性失活(huó)的(de)程度與抗胰蛋白酶相似,因此,尿酶活性用來作為膨化大豆加熱是否合適的間接估測指標。脲酶活性沒有負值,最低為0。在我國現行的國標推薦值為(wéi)0.3,在美國一般認為以不超過0.2為宜,並且針對日(rì)糧中(zhōng)有尿素的反芻動物而言不得超過0.12,當(dāng)然對於家禽(qín)和豬0.3或稍(shāo)高都可以接受。國內很多大企業一般均采(cǎi)用0.2。
    實驗室定(dìng)量測定脲酶活性的方法較(jiào)複雜,有滴定法(fǎ)和pH增值法兩種,已有研究表明兩者對同(tóng)一樣品測(cè)得的數值(zhí)也不相等。目前國內絕大部(bù)分企業都采用快速而(ér)簡單的簡易判定方法定性地估(gū)測脲(niào)酶(méi)活性,一般(bān)來說,主要有如下兩種方法。
    一.液態法
    1.原理:大(dà)豆製品(pǐn)中的脲酶可使尿素分解成氨,會使酚紅指示劑改變(biàn)顏色。
    2.試劑
    2.1尿素:GB696,分析純。
    2.2酚紅指示劑
    2.2.1稱取0.1g酚紅,加1.43mL0.1mol/L氫氧化鈉溶液,在研(yán)缽中研磨以促溶解;
    2.2.2轉移至250mL定量瓶中,加蒸餾水至刻度,搖勻備用。
    3.操作(zuò)方法
    3.1取0.2g粉(fěn)末樣(yàng)品,置於25mL比色管中。
    3.2加0.02g尿素,加(jiā)酚紅指示劑2滴,再加水20mL,充分搖勻15s。
    3.3記錄粉紅色出現時間,並根據時間判斷尿酶活性,顏(yán)色出現時間應(yīng)少(shǎo)於15min。
    顏色出現時間 脲酶活性
    1min 極強     1~5min 強     5~15min 稍有 15min 無 同時作空白對照試驗。
    樣品空白(bái)(不加(jiā)尿素)及(jí)試劑(jì)空白(不加樣品),隻有上述空(kōng)白正常時,即酚紅指示劑不改變顏色,試驗結果(guǒ)才是可靠的。
    一般企(qǐ)業認為7、8分鍾變色較為合適。
    二、半固態法
    1.原理:大(dà)豆製品中的脲酶可使尿素分解成氨,會使酚紅指示劑改變顏色。
    2.試劑
    2.1稀硫酸(H2SO4)0.2N。
    2.2尿素一酚紅試劑
    2.2.1將1.2克酚紅溶解(jiě)於30ml0.2N的NaOH中;
    2.2.2用蒸餾水將之稀釋至約300mL;
    2.2.3加入90g尿素(分析(xī)純)並溶解之;
    2.2.4用蒸餾水稀(xī)釋至2L;
    2.2.5加入14mL 1.0N的H2SO4或70mL o.2N的H2SO4;
    2.2.6用蒸餾(liú)水稀釋至最後體積3L;
    2.2.7溶液應具明亮的琥珀色。

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