1 範圍（wéi）
本標準規定了（le）蛋禽H5亞型禽流感免疫（yì）抗體卵黃（huáng）檢測技（jì）術中的樣本采集、實驗準備、實驗方法、結果判定等操作方法（fǎ）。
本標準適用於用卵（luǎn）黃進行蛋禽H5亞型禽流感滅（miè）活疫苗免疫抗體檢測。
2 規範性引用文件（jiàn）
下列文件中的（de）條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的（de）引用文件，其（qí）隨後所有的修改單位（不包括（kuò）勘誤的內容）或（huò）修訂版均不（bú）適用（yòng）於（yú）本標準，然而（ér），鼓勵根據本標準達成協（xié）議的各方研究可以使用（yòng）這些文件的最新版本。凡是不注日期的（de）引用文件，其最新版本適（shì）用於本標準。
GB/T 18936 高致病性禽流感診斷技（jì）術
3 術語和定義
下列術語與定義（yì）適用於本標準（zhǔn）。
3.1 蛋禽 已經產蛋的（de）家禽。
3.2 檢樣 經過直接稀釋或氯仿萃取製備好的、用於檢測的樣品（pǐn）。
3.3 跳管 血凝抑製試驗中（zhōng），同一檢樣在反應板上出現的前、後孔凝（níng）集抑製而中間（jiān）孔凝集的現象（xiàng）。
4 樣本采集
采集蛋禽免疫接種H5亞型禽流感滅活疫苗21d後所產的新鮮禽蛋（dàn）。
5 實驗準備
5.1 材料準備（bèi）
5.1.1 儀器設備
96孔90οV型微（wēi）量反應板、微量移液器、滴頭、微量振蕩器、離心機、液體快速混合器（qì）、容量（liàng）瓶。
5.1.2 試劑
a) 葡萄糖、檸檬酸鈉、檸檬酸、氯化鈉、磷（lín）酸氫二鈉、磷酸二（èr）氫鈉、氫氧化鈉、鹽酸等。
b) 禽流感病毒H5亞型HI抗原、禽流感病毒H5亞型陽性血清和陰性血（xuè）清。
5.2 試液配製
5.2.1 阿氏（Alsevers）液配製
稱取葡萄糖（táng） 2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100ml容量瓶中，定溶（róng），散熱溶解後調PH值至6.1，69kPa15min高壓滅菌，4℃保存備用。
5.2.2 1%雞紅細胞懸（xuán）液配製
采集至少三隻SPF公（gōng）雞或無禽流感和新城疫（yì）等抗體的健康公雞的血液與（yǔ）等體積阿氏液混合，用（yòng）PH7.2 0.01mol/L PBS洗滌3次，每次均以1000r/min離心10min，洗滌後用PBS配成1%(V/V)紅細（xì）胞懸液，4℃保存備用。
5.2.3 0.01mol/L PBS試液
a) 稱取磷酸氫二鈉2.74g，磷酸二氫鈉0.79g，用適量蒸餾水溶解後，移（yí）入100mL容量瓶中，定溶。
b) 量取上述溶液40ml，加入氯化鈉（nà）8.5g溶解（jiě）後，移入1000mL容量瓶中，定（dìng）溶。
c) 用（yòng）0.01mol/L氫（qīng）氧化鈉或0.01mol/L鹽酸調PH至（zhì）7.2，高壓滅菌備用。
5.3 檢樣製（zhì）備
5.3.1 卵黃直接稀釋
在樣品（pǐn）管（guǎn）中加入0.5mlPBS液，再吸（xī）取0.5ml卵黃做1:1稀釋，混勻（yún）製成（chéng）卵黃檢樣備用。
5.3.2 卵黃氯仿萃取
取5.3.1製備好的卵黃檢樣0.4ml加入等量氯仿，迅速用液體快速混合器充分振蕩混勻（yún），室溫靜（jìng）置30min，3000r/min離心5min，取（qǔ）上清液備用。
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